實驗方法：
   除特殊注明外，所有操作均在0—4℃下進(jìn)行。
1. 將純化的原代細(xì)胞細(xì)胞核浸于緩沖液中孵育10min使之膨大去凝縮。之后約10000g離心10min，用緩沖液重懸沉淀，并重復(fù)這一步驟2次；
2. 用含DNA酶Ⅰ（0.01g/L）的緩沖液重懸凝膠樣溶脹的細(xì)胞核沉淀。充分混勻并室溫孵育30min，孵育的中途將上清調(diào)節(jié)至含約0.1mmol/L MgCl^₂。隨著DNA被切割裂解，染色質(zhì)很快失去了凝膠狀特性?？赏ㄟ^相差顯微鏡檢測核膜“影子”的產(chǎn)生；
3. 采用固定角轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子，約60000g離心30min；
4. 用緩沖液重懸核膜粗產(chǎn)物，并再次離心。重復(fù)這一步直至DNA釋放為止（即監(jiān)測上清在280nm下的吸光度，直至達(dá)到一很低平臺）；
5. 選擇性地用KCl溶液洗滌獲得地核膜，以加速離子結(jié)合蛋白，尤其是組蛋白的去除。然后約60000g離心30min；
6. 將核膜用核膜懸浮緩沖液重懸，覆蓋配制的4個梯度溶液，置于吊桶式離心機中離心若干小時或過夜，以收集核膜等密度層；
7. 純化的核膜應(yīng)該主要聚集在1.5mol/L與1.8mol/L兩蔗糖層的界面，用巴斯德吸管小心地從梯度液中移出核膜層；
8. 通過相差顯微鏡，或者通過瓊脂糖包埋進(jìn)行負(fù)染和/或薄片電鏡，檢查核膜的完整性；
9. 對純化標(biāo)本進(jìn)行必須的生化分析，如SDS-PAGE或是酶學(xué)實驗；內(nèi)源性過氧化物酶是大鼠肝臟核膜的一個合適的標(biāo)志，同時也存在Mg-ATP酶以及很多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)酶；m.hqjnkj.com