培養(yǎng)基的制備方法及基本原則

    培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料。不用的培養(yǎng)基的成分不同，但是步驟卻大徑相同。

    培養(yǎng)基的制備方法

    1.配料

    配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱(chēng)取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

    2.溶解

    淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀

    加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

    3.調(diào)PH

    用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。

    4.過(guò)濾

    濾紙或棉花進(jìn)行過(guò)濾。（有時(shí)可以省去）

    5.分裝

    一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

    （1）三角瓶

    若作靜置培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，zui多不能超過(guò)150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

    （2）試管分裝

    液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；

    固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

    6.包扎

      分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。

    7.滅菌

    按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞，培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。

    8.擺斜面

    滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個(gè)斜面，約占試管長(zhǎng)度的1/2。

    9.貯存

    培養(yǎng)基在30℃下放置一天，無(wú)污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。

    培養(yǎng)基配置原則

    1、選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

    所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源，但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型復(fù)雜，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。

    2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適

    培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低時(shí)不能滿足微生物正常生長(zhǎng)所需，濃度過(guò)高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用，例如高濃度糖 類(lèi)物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)，反而起到抑菌或殺菌作用。另外，培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng) 繁殖和（或）代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比（C/N）的影響較大。

    3、控制pH條件

    培養(yǎng)基的 pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類(lèi)型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類(lèi)微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的zui適pH條件各不相同，一般來(lái)講，細(xì)菌 與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是，在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過(guò)程中，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分 解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制，往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或（和）代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此， 為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。

    4、控制氧化還原電位（redoxpotential）

    不同類(lèi)型微生物生長(zhǎng)對(duì)氧化還原電位（F）的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時(shí)可正常生長(zhǎng)，一般以+0.3一+0.4V為宜，厭氧性微 生物只能在F值低于+0.1V條件下生長(zhǎng)，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸，在+0.1V以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關(guān)， 也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對(duì)穩(wěn)定的條件下，可通過(guò)增加通氣量（如振蕩培養(yǎng)、攪拌）提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養(yǎng) 基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。

    5、原料來(lái)源的選擇

    在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

    滅菌處理

    要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。